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All-in-One RT SuperMix for qPCR試劑

All-in-One RT SuperMix for qPCR試劑

型號(hào):AZ00003   更新時(shí)間:2023-11-08

簡(jiǎn)要描述:

All-in-One RT SuperMix for qPCR試劑(with dsDNas)是一款高效、便捷、減少污染的高質(zhì)量一鏈cDNA 合成試劑盒,包含M-MLV GIIIReverse Transcriptase 及其反應(yīng)Buffer、RNA 酶抑制劑、dNTPs,Oligo(dT)20VN 和隨機(jī)引物等一鏈cDNA 合成所需的所有組分,僅需加入RNA 模板和水即可開始反應(yīng)。

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儲(chǔ)運(yùn)條件

-20℃

產(chǎn)品組成

All-in-One RT SuperMix for qPCR試劑

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

All-in-One RT SuperMix for qPCR(with dsDNase) 是一款高效、便捷、減少污染的高質(zhì)量一鏈cDNA 合成試劑盒,包含M-MLV GIIIReverse Transcriptase 及其反應(yīng)Buffer、RNA 酶抑制劑、dNTPs,Oligo(dT)20VN 和隨機(jī)引物等一鏈cDNA 合成所需的所有組分,僅需加入RNA 模板和水即可開始反應(yīng)。All-in-One RT SuperMix for qPCR(withdsDNase) 作為升級(jí)后的一鏈cDNA 合成試劑盒,15 分鐘內(nèi)最長(zhǎng)可獲得12 kb cDNA,產(chǎn)物可用于qPCR、普通PCR 等實(shí)驗(yàn)。從組織或細(xì)胞中提取的RNA 往往殘留基因組DNA 污染,如果反轉(zhuǎn)錄前不做去除處理,下游進(jìn)行qPCR 反應(yīng)時(shí)基因組DNA 與cDNA會(huì)同時(shí)進(jìn)行擴(kuò)增,尤其是引物設(shè)計(jì)在同一外顯子上時(shí),影響定量準(zhǔn)確性。本試劑盒所采用的dsDNase 能夠特異性消化雙鏈DNA 或DNARNA雜合雙鏈中的DNA,并且具有熱敏感性,在逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)溫度下即可快速不可逆地失活。與傳統(tǒng)使DNase I 去除基因組DNA 污染的方法相比,dsDNase 無(wú)需額外加入EDTA 進(jìn)行失活,不僅節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間,而且降低了對(duì)逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的抑制??梢罁?jù)基因組DNA 污染嚴(yán)重程度,選擇去基因組DNA 污染與反轉(zhuǎn)錄分開進(jìn)行,或者去基因組DNA 污染與反轉(zhuǎn)錄一步進(jìn)行的操作方法。

使用方法

針對(duì)基因組DNA 含量低的RNA 樣品(推薦方案)

All-in-One RT SuperMix for qPCR試劑

① 于冰上配制如下反應(yīng)體系:

a. 推薦使用試劑盒提取的高質(zhì)量RNA 作為模板。

② 輕柔吸打混勻,瞬離;

③ 37℃溫育2 min,以去除基因組DNA 污染;

④ 55℃溫育15 min;

⑤ 反應(yīng)結(jié)束后,85℃溫育2 min 以終止反應(yīng);

⑥ 迅速將獲得的cDNA 置于冰上,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn);或立即保存于-20℃。

針對(duì)基因組DNA 含量高RNA 樣品

1. 基因組DNA 污染去除

① 于冰上配制如下反應(yīng)體系:

a. 推薦采用試劑盒提取的RNA 作為模板。

② 輕柔吸打混勻,瞬離;

③ 37℃溫育2 min,以去除基因組DNA 污染;

注:若RNA 中基因組DNA 污染嚴(yán)重,可適當(dāng)延長(zhǎng)37℃溫育時(shí)間至5 min。

④ 65℃溫育2 min,使dsDNase 失活,然后置于冰上。

2. 第一鏈cDNA 合成

① 于冰上配制如下反應(yīng)體系:

② 輕柔吸打混勻,瞬離;

③ 50℃溫育15 min;

注:若目標(biāo)RNA 不含Poly(A) 結(jié)構(gòu),可預(yù)先25℃溫育10 min。

④ 反應(yīng)結(jié)束后,85℃溫育2 min,以終止反應(yīng);

⑤ 將獲得的cDNA 溶液置于冰上,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

注:cDNA 溶液置于-20℃儲(chǔ)存,建議不超過1 周;置于-80℃可長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

注意事項(xiàng)

預(yù)混液中已經(jīng)包含Oligo(dT)20VN 和隨機(jī)引物,不僅適用于包含Poly(A) 結(jié)構(gòu)的真核生物mRNA,也適用于不含Poly(A) 結(jié)構(gòu)的原核生物RNA、真核生物rRNA 和tRNA 等模板,但不適用于miRNA 等小RNA 模板。

美國(guó)Azaood公司成立于2004年,是一家開發(fā)和生產(chǎn)用于生命科學(xué)研究、診斷和生物技術(shù)應(yīng)用的高質(zhì)量純化酶、蛋白質(zhì)、核酸和細(xì)胞分離試劑盒、胎牛血清的;Azood公司是通過了ISO9001認(rèn)證的主要制造商,可以滿足從研究到大規(guī)模批量生物加工和OEM應(yīng)用與要求的公司。




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