本試劑盒針對哺乳動物細(xì)胞、組織開發(fā)的專用裂解液DC，在10 分鐘內(nèi)完成細(xì)胞和組織的裂解、提

取和純化。使用高效硅基DNA 純化柱，高效結(jié)合基因組DNA，從而獲得純度高，產(chǎn)量高的基因組

DNA。提取的基因組DNA 完整性高，適合PCR、qPCR、酶切、Southern 雜交、文庫構(gòu)建、克隆等。

本試劑盒僅供研究使用，不可用于臨床、食品、化妝品等領(lǐng)域。

試劑盒組成

保存條件

室溫保存一年。

自備材料

無水乙醇、無DNase 和無RNase 離心管、RNaseA（10mg/mL，或貨號QR0101）

使用方法

1. 樣本處理

1.1 從動物組織中提取DNA

1.1.1 取20-100mg 樣本放入液氮中充分研磨，加入700μL 裂解液DC，充分混勻，室溫作用1 分鐘。

或取20-100mg 樣本加入700μL 裂解液DC，加入1 顆鋼珠，放入組織研磨器中，研磨1-2 分鐘。

1.1.2 （選做）加入5μL RNase A（10mg/mL），室溫靜置5-10 分鐘。

1.1.3 加入350μL 無水乙醇，充分混勻，12,000rpm 離心1 分鐘。

1.1.4 取700μL 上清加到DNA 純化柱中，按照步驟2.1-2.7 操作。

1.2 從懸浮細(xì)胞中提取DNA

1.2.1 細(xì)胞1,000rpm 離心5 分鐘，收集細(xì)胞沉淀。

1.2.2 細(xì)胞數(shù)量<5×106 個時，加入500μL 裂解液DC。細(xì)胞數(shù)量為5×106~1×107 個時，加入700μL 裂

解液DC。輕輕吹打混勻，室溫放置1 分鐘。

1.2.3 （選做）加入5μL RNase A（10mg/mL），室溫靜置5-10 分鐘。

1.2.4 加入0.5 倍體積的無水乙醇，上下顛倒混勻。

1.2.5 取700μL 加入DNA 吸附柱中，按照步驟2.1-2.7 操作。

1.3 從貼壁細(xì)胞中提取DNA

1.3.1 胰酶消化細(xì)胞后1,000rpm 離心5 分鐘，收集細(xì)胞沉淀。

1.3.2 細(xì)胞數(shù)量<5×106 個時，加入500μL 裂解液DC。細(xì)胞數(shù)量為5×106~1×107 個時，加入700μL 裂

解液C。輕輕吹打混勻，室溫放置1 分鐘。

1.3.3 （選做）加入5μL RNase A（10mg/mL），室溫靜置5-10 分鐘。

1.3.4 加入0.5 倍體積的無水乙醇，上下顛倒混勻。

1.3.5 取700μL 加入DNA 吸附柱中，按照步驟2.1-2.7 操作。

2. DNA 純化

2.1 12,000rpm 離心30 秒，倒掉收集管中廢液。

2.2 向吸附柱中加入500μL 洗滌液DCW1，12,000rpm 離心1 分鐘，倒掉收集管中廢液。

2.3 向吸附柱中加入500μL 洗滌液DCW2，12,000rpm 離心30 秒，倒掉收集管中廢液。

2.4 重復(fù)步驟2.3 一次。

2.5 12,000rpm 離心2 分鐘，倒掉收集管中廢液。

2.6 將吸附柱放入新無DNase 和無RNase 離心管，加入30-50μL 洗脫液C，室溫放置1 分鐘。

2.7 12,000rpm 離心2 分鐘，得到DNA 溶液，-80℃保存。

注意事項

1. 經(jīng)常更換手套，防止DNA 污染。

2. 使用無DNase 無RNase 的吸頭和離心管，防止DNA 降解。

3. 常更換吸頭，防止交叉污染。

4. 動作輕柔，防止基因組DNA 斷裂。

5. 為了提高洗脫效率，可提前將洗脫液C 置于65℃水浴后再使用。