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細(xì)胞和組織PCR 試劑盒Plus（免核酸提取）

貨號(hào)：Nu-C01

試劑盒應(yīng)用

本試劑盒可用于動(dòng)物組織或細(xì)胞DNA 的克隆、重組細(xì)胞株鑒定、DNA 病毒鑒定、STR 鑒定等。TC-DNA-Lysis 采用配方，10 分鐘內(nèi)裂解各種細(xì)胞和組織。使用過(guò)程中無(wú)需大體積樣本、無(wú)需反復(fù)離心，從而獲得高質(zhì)量的DNA 模板。經(jīng)過(guò)驗(yàn)證，該試劑盒可以對(duì)單個(gè)細(xì)胞或10 個(gè)病毒粒子進(jìn)行檢測(cè)。

本試劑盒僅供研究使用，不可用于臨床、食品、化妝品等域。

試劑盒組成

保存條件

-20oC 保存。

使用將TC-DNA-Lysis 室溫充分混勻，使用可4℃保存。

2×TaqMix(With Dye)溶解后需置于冰上，避免反復(fù)凍融。

需要準(zhǔn)備

金屬恒溫浴、離心機(jī)、PCR 儀

使用方法

一、不同樣品的處理方法

1. 組織液的處理

（1）組織液包括組織研磨液、細(xì)胞懸液等。取10 μL組織液置于離心管中。

（2）加入20 μLTC-DNA-Lysis。

（3）充分混勻。

（4）置于55℃作用5 分鐘，然后95℃作用5min。溶液即為DNA 模板。

2. 組織塊的處理

（1）用眼科剪剪取1-2mm 的組織塊，并將組織塊剪成肉泥狀。

（2）加入20 μL TC-DNA-Lysis。

（3）充分混勻。

（4）置于55℃作用5 分鐘，然后95℃作用5min。

（5）10,000 轉(zhuǎn)離心60 取上清。上清即為DNA 模板。

3. 在DNase free 的離心管中配制PCR 反應(yīng)體系

4. 按照以下方法設(shè)定PCR 反應(yīng)

注意事項(xiàng)

一、試劑盒使用注意事項(xiàng)

（1）所有試劑應(yīng)按照適合溫度儲(chǔ)存。請(qǐng)勿反復(fù)凍融。

（2）使用后均需要對(duì)操作區(qū)進(jìn)行消毒，消毒方式可以采用75%乙醇或核酸消除劑等。耗材均需使用商品化的無(wú)酶耗材。

（3）TC-DNA-Lysis 采用配方，若出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)小球狀物質(zhì)屬于正?，F(xiàn)象。

（4）TC-DNA-Lysis 頻繁使用，可在4℃保存。不使用可放-20℃保存。

二、樣本注意事項(xiàng)

（1）細(xì)胞在含/不含血清的環(huán)境中均可直接使用試劑盒。

（2）擴(kuò)增2kb 以內(nèi)片段，細(xì)胞樣品濃度不超過(guò)1000 個(gè)細(xì)胞。如若擴(kuò)增片段超過(guò)2kb，可適當(dāng)提高細(xì)胞濃度。

（3）不同組織使用不同的眼科剪和眼科鑷進(jìn)行處理，防止交叉污染導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果偏差。

三、試劑盒使用過(guò)程中注意事項(xiàng)

（1）PCR 過(guò)程中推薦使用陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照。

（2）整個(gè)過(guò)程中使用的吸頭、離心管等耗材應(yīng)丟棄在含有75%乙醇或核酸消除劑的容器中，防止形成環(huán)境污染。

（3）2×Master TaqMix(With Dye)已包含染料，可在反應(yīng)結(jié)束后直接進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。

（4）PCR 產(chǎn)物3’末端含有A，可直接進(jìn)行TA 克隆。

四、試劑盒使用后注意事項(xiàng)

（1）TC-DNA-Lysis 處理后的DNA 模板可在-20℃保存至少1 個(gè)月。避免反復(fù)凍融，防止基因組斷裂。

（2）PCR 反應(yīng)完成后，嚴(yán)禁在實(shí)驗(yàn)區(qū)開(kāi)蓋。應(yīng)在污染區(qū)進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，防止氣溶膠污染。

（3）為防止試劑盒污染，請(qǐng)勿將不同批號(hào)試劑盒混用。

檢測(cè)實(shí)例

常見(jiàn)問(wèn)題解析