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293細(xì)胞無血清懸浮培養(yǎng)基產(chǎn)品使用方法
更新時間:2021-11-23   點擊次數(shù):1577次

293細(xì)胞無血清懸浮培養(yǎng)基產(chǎn)品使用方法

產(chǎn)品描述

Balance CD 293 培養(yǎng)基適用于懸浮培養(yǎng)條件下的HEK293細(xì)胞(如293-F,293-T, Expi-293F

等)的高密度生長和瞬時轉(zhuǎn)染表達(dá)。 Balance CD 293 培養(yǎng)基含有細(xì)胞生長所需的全部營養(yǎng)成

份,無需添加任何添加物即可使用。(注意:此培養(yǎng)基不包含抗生素以及血清)

 

產(chǎn)品特點

?? 瞬時轉(zhuǎn)染專用培養(yǎng)基,適用于HEK293細(xì)胞高密度懸浮培養(yǎng)

?? 無蛋白、無動物源、化學(xué)成分限定

?? 即用型*培養(yǎng)基,無需添加額外成分

基礎(chǔ)參數(shù)

外觀:澄清透明紅色液體

滲透壓:275±15 mOSM

pH:6.9-7.4

無菌檢測:無菌

內(nèi)毒素: <5 EU/mL

儲存條件:2-8℃,避光

效期:12個月

產(chǎn)品用途:僅用于科學(xué)研究,不適用于人類或動物的診斷和治療

產(chǎn)品使用方法

細(xì)胞馴化

1)直接馴化

大部分情況下,培養(yǎng)于其他培養(yǎng)基中的細(xì)胞,可以直接適應(yīng)Balance CD 293 medium,只要

按照日常傳代方式(稀釋)更換培養(yǎng)基即可。

2)漸進(jìn)式馴化

注意:選用低代次、處于對數(shù)生長期的細(xì)胞進(jìn)行馴化

在原培養(yǎng)基中復(fù)蘇細(xì)胞并繼續(xù)使用該培養(yǎng)基傳代23次至細(xì)胞生長穩(wěn)定,當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到2x106 cells/ml后進(jìn)行傳代,傳代細(xì)胞密度控制在0.5-0.6×106 cells/mL,5-10%血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基或其他無血清培養(yǎng)基與Balance CD 293培養(yǎng)基的比例為75:25

將細(xì)胞置于37℃,5% CO2,轉(zhuǎn)速為110-175 rpm的恒溫?fù)u床中進(jìn)行培養(yǎng);

當(dāng)細(xì)胞密度3-4天后達(dá)到3x106 cells/ml且細(xì)胞活率>90%,傳代時5-10%血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基或其他無血清培養(yǎng)基與Balance CD 293培養(yǎng)基的比例為50:50,細(xì)胞密度控制在0.5×106 cells/mL。如細(xì)胞生長慢,可離心上清,留20%條件培養(yǎng)基,加入80%5-10%血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基或其他無血清培養(yǎng)基與Balance CD 293 培養(yǎng)基比例為75:25的混合培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng);

重復(fù)步驟逐步增加Balance CD 293培養(yǎng)基所占的比例(5-10%血清的傳統(tǒng)培養(yǎng)基或其他無血清培養(yǎng)基與Balance CD 293 培養(yǎng)基的比例為25:7510:90)直到100%Balance CD 293培養(yǎng)基;

經(jīng)過在100% Balance CD 293 培養(yǎng)基中的幾次傳代培養(yǎng),傳代后3-4天細(xì)胞的密度可以達(dá)到2-3×106 cells/mL,細(xì)胞活率大于90%,這說明細(xì)胞已經(jīng)*適應(yīng)了Balance CD 293 培養(yǎng)基。之后進(jìn)行細(xì)胞的傳代培養(yǎng)時,細(xì)胞的起始密度可以降到0.3×106 cells/mL,一般傳代2-3次后再進(jìn)行轉(zhuǎn)染實驗。

注意: 一般細(xì)胞馴化過程中,前三代細(xì)胞的狀態(tài)可能不是很好,但一般從第四代開始狀態(tài)會有改善

細(xì)胞傳代

1)取細(xì)胞培養(yǎng)樣品,人工或儀器測定細(xì)胞密度以及活率;

2)計算傳代所需的細(xì)胞用量,建議起始細(xì)胞密度為0.2-0.4×106 cells/mL。建議復(fù)蘇的細(xì)胞至少培養(yǎng)兩代后再用于其他用途。傳代培養(yǎng)體積建議為15-20 mL100 mL的培養(yǎng)瓶)或50-60 mL250 mL 的培養(yǎng)瓶);

3)將細(xì)胞置于37℃,5%CO2,轉(zhuǎn)速為110-175 rpm的恒溫?fù)u床中進(jìn)行培養(yǎng),3-4天傳代一次。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染在Balance CD 293培養(yǎng)基中,采用商業(yè)化轉(zhuǎn)染試劑(例如 Gibco 293Fectin™

ExpiFectamine™ 293 Transfection Kit )或 PEI 可以實現(xiàn)對 HEK293 細(xì)胞的高效轉(zhuǎn)染。

細(xì)胞復(fù)蘇

1)迅速取出凍存的細(xì)胞,在37℃水浴條件下進(jìn)行解凍(可以在水中輕輕晃動,時間控制在60s以內(nèi));

2)輕輕地混勻細(xì)胞并將融化的細(xì)胞全部移至15mL無菌離心管中,逐滴加入10 mL預(yù)熱到37℃的培養(yǎng)基,離心換液(100 g5 min)去除全部上清,加入新鮮培養(yǎng)基重懸,使得細(xì)胞密度達(dá)

0.4-0.6×106 cells/mL;

3)將細(xì)胞置于37℃5%CO2,轉(zhuǎn)速為110-175 rpm的恒溫?fù)u床中進(jìn)行培養(yǎng);

42-4天后通過人工或儀器測定細(xì)胞的密度以及活率,如果細(xì)胞密度達(dá)到1.0×106 cells/mL,活率達(dá)到85%以上則可進(jìn)行傳代培養(yǎng);

5)如果細(xì)胞密度低于1.0×106 cells/mL,則建議對細(xì)胞進(jìn)行離心(100 g,5 min),然后重懸于20-30 mL 的新鮮培養(yǎng)基中使得細(xì)胞密度為0.4-0.6×106 cells/mL 左右,并繼續(xù)培養(yǎng)至細(xì)胞正常生長則可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

細(xì)胞凍存

1)凍存細(xì)胞時,要選擇處于對數(shù)生長期同時細(xì)胞活率在90%以上的 HEK293 cells

2)事先計算好凍存的細(xì)胞管數(shù)和所用的培養(yǎng)基的體積;

3)制備細(xì)胞凍存液:46.25% 的新鮮Balance CD 293培養(yǎng)基+46.25% 條件Balance CD 293 培養(yǎng)基,混合之后再加入7.5% DMSO,存放在4℃,一般為當(dāng)天用當(dāng)天制備;

4)對細(xì)胞樣品進(jìn)行計數(shù);

5)取樣計數(shù),以100 g,3-5 min的條件離心收集細(xì)胞,然后用凍存培養(yǎng)基( 4℃ )重懸細(xì)胞,使得細(xì)胞密度為 5-10×106 cells/mL

6)取樣計數(shù),調(diào)整細(xì)胞密度;迅速分裝細(xì)胞到無菌的凍存管中,一般2 mL 的凍存管放1-1.5 mL,貼好標(biāo)簽,密封;

7)將細(xì)胞凍存管放到程序降溫凍存盒(注意填充異丙醇,4℃預(yù)冷)中,置于-80℃ 冰箱(每分鐘下降1℃),過夜存放后將細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮罐中進(jìn)行保存。


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