一、 透射電鏡觀察細胞樣品實驗檢測服務實驗儀器與試劑
表格一:實驗儀器
儀器 |
透射電子顯微鏡 |
超薄切片機 |
表格二:試劑
試劑 |
PBS(pH7.4) |
無水乙醇 |
丙酮 |
1%鋨酸 |
Pon812包埋套裝 |
醋酸雙氧鈾 |
醋酸鉛 |
二、 實驗步驟
1. 醛類固定:加入1mL 2.5%戊二醛溶液(PBS 稀釋),4度固定過夜;
2.清洗:用PBS清洗4次,每次靜置15min;
3.鋨酸固定:用1%鋨酸溶液 4度固定2h;
4.清洗:用PBS清洗4次,每次靜置15 min;
5.脫水:用50%、70%、80%、90%乙醇梯度脫水各靜置15min(在70%乙醇中靜置過夜),再用100%乙醇脫水2次,每次靜置20min;
6.置換:用丙酮置換2次,每次靜置15min;
7. 浸漬:過程如下:
A.丙酮:包埋劑=2:1(體積比)的浸漬液中浸漬1h;
B.丙酮:包埋劑=1:2(體積比)的浸漬液中浸漬4h;
C.純包埋劑浸漬2次, 每次24h;
8. 包埋:將樣品放入盛有純包埋劑的包埋板中;
10.聚合:將包埋板置于65℃條件下各聚合48h以上;
11.修塊:將包埋頭修成梯形,且樣品表面積小于0.2mm×0.2mm;
12.超薄切片:切片厚度70nm;
13.染色:醋酸雙氧鈾染色 10min后清洗;
醋酸鉛染色 10min后清洗;
14. 上機檢測。
15021202164
上海市楊浦區(qū)國康路100號2層
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