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SILAC-exosome定量分析服務(wù)
更新時(shí)間:2019-12-26   點(diǎn)擊次數(shù):1100次

、簡(jiǎn)介:

Exosome(外泌體)是具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu)、直徑約為30-150nm、密度在1.13-1.21g/ml的膜性囊泡。在exosome的囊泡結(jié)構(gòu)中含有細(xì)胞來(lái)源相關(guān)的蛋白質(zhì)、核酸、脂質(zhì)和小分子等物質(zhì),能作為信號(hào)分子傳遞給其他細(xì)胞以進(jìn)行細(xì)胞間通訊。研究發(fā)現(xiàn)exosome在眾多生理、病理過(guò)程中發(fā)揮著著重要作用。鑒于不同細(xì)胞分泌的exosome具有不用的組成成分和功能,故而exosome有望在多種疾病的早期診斷中發(fā)揮作用,此外,基于exosome的膜性結(jié)構(gòu),亦可作為靶向藥物的載體進(jìn)行疾病治療。Exosome的這些特性使其成為當(dāng)前的熱門研究對(duì)象。

Exosome在細(xì)胞中的蛋白質(zhì)含量極低,分離并獲取足量的exosome蛋白是進(jìn)行LC-MS分析的前提條件。SILAC結(jié)合LC-MS就能很好的進(jìn)行exosome蛋白的定量比較分析,體現(xiàn)在:(1)SILAC是體內(nèi)標(biāo)記,自然在exosome中的蛋白質(zhì)也是SILAC標(biāo)記的;(2)所需的蛋白量少,SILAC標(biāo)記的和未標(biāo)記的exosome蛋白各15-20μg足夠進(jìn)行MS鑒定與定量;(3)蛋白質(zhì)提取和后續(xù)操作步驟極為簡(jiǎn)單方便,只需提取exosome蛋白、定量、1:1混合即可。(3)蛋白質(zhì)定量和分析軟件成熟(Maxquant和Perseus),結(jié)果分析方便直觀。

二、服務(wù)方案:

(一)整體服務(wù):

只需客戶提供細(xì)胞即可,我方負(fù)責(zé)完成:

SILAC培養(yǎng)基制備。

細(xì)胞SILAC標(biāo)記及標(biāo)記效率MS檢測(cè);

SILAC標(biāo)記細(xì)胞與非標(biāo)記細(xì)胞擴(kuò)增、exosome分離及exosome蛋白質(zhì)提??;

提取蛋白質(zhì)定量、1:1混合、SDS-PAGE分離及染色;

切割條帶,分別進(jìn)行LC-MS測(cè)試;

MS數(shù)據(jù)分析,完成蛋白質(zhì)的鑒定及定量分析,篩選差異表達(dá)蛋白;

差異表達(dá)蛋白常規(guī)生物信息學(xué)分析;

(二)合作共贏方案:

原則是通過(guò)協(xié)商簽訂合同,雙方各完成一部分實(shí)驗(yàn)內(nèi)容。

客戶方需從我方購(gòu)買相應(yīng)的SILAC培養(yǎng)基及耗材。我方提供細(xì)胞SILAC標(biāo)記的實(shí)驗(yàn)方案,協(xié)助客戶完成細(xì)胞的SILAC標(biāo)記過(guò)程。

標(biāo)記完成后,需用LC-MS鑒定細(xì)胞標(biāo)記效率。該步驟需交由我方完成鑒定。

終正式實(shí)驗(yàn)的蛋白質(zhì)樣品,需交由我方完成MS鑒定和定量分析。

三、其他特色:

SILAC培養(yǎng)基。我方能生產(chǎn)多種類型的SILAC培養(yǎng)基(K6R6、K4R6、K6R8、K8R10等),7-10個(gè)工作日發(fā)貨,免去客戶從國(guó)外進(jìn)口SILAC培養(yǎng)基及其標(biāo)記氨基酸的漫長(zhǎng)貨期。

SILAC培養(yǎng)基,500ml起訂。

我方同時(shí)銷售SILAC相關(guān)的試劑/耗材(dialyzed FBS,filter等),歡迎咨詢。

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